Membran filtrasyon düzeneği hazırlanır ve bağlantıların doğru ve sağlam olup olmadığı kontrol edilir. Filtre desteği ve üzerindeki huni, bek alevinden geçirilerek steril edilir. Alevden geçirilmiş bir pens yardımıyla koruyucusundan çıkartılan steril membran filtre, filtre desteği üzerine dikkatlice yerleştirilir. Membran filtrenin tam olarak yerleşmesi önemlidir. Huni yerine yerleştirilir ve çalışılacak örnek huni içerisine konur. Vakum pompası çalıştırılarak, musluk açılır ve filtrasyon işlemi başlamış olur. İşlem tamamlandıktan sonra vakum musluğu ve vakum pompası kapatılır. Bek alevinden geçirilen bir pens yarıdımyla membran filtre alınır, analizi yapılacak mikroorganizma için uygu besiyeri üzerine yerleştirilir. Besiyerleri TERS ÇEVRİLMEDEN inkübatöre kaldırılır ve uygun sıcaklık ve sürede inkübe edilirler.
Sonuçların okunması:
Standart mikrobiyolojik membran filtrasyon analizlerinde sonuçlar, petride sayılan koloni sayısı (kob)/ filtreden geçirilen örnek ml’si olarak verilir. Örneğin 100ml su örneğinde, membran filtrede 2 adet E.coli bakterisi sayıldıysa sonuç,
Ecoli = 2 kob/100ml olacaktır.
TOPLAM BAKTERİ SAYIMI
100 ml örnek düzenekten süzülür. Örneğin süzüldüğü filtre kağıdı TSA (Triptic Soy Agar)'a konur 30-35ºC’de 24-72 saatlik inkübasyon sonunda oluşan tüm koloniler sayılır ve ekim ml’si doğrultusunda gerekli hesaplamalar yapılarak sonuca gidilir.
KÜF - MAYA SAYIMI
100 ml örnek düzenekten süzülür. Örneğin süzüldüğü filtre kağıdı SDA (Saboraud Dextrose Agar)'a konur. 25ºC’de 5 günlük inkübasyon sonunda oluşan tipik maya-küf kolonileri sayılır ve ekim ml’si doğrultusunda gerekli hesaplamalar yapılarak sonuca gidilir.
(Eğer numunedeki bakteri yükünün fazla olacağını düşünüyorsanız, SDA yerine SDCA yani Chloramphenicol katkılı SDA’yı da kullanabilirsiniz)
E. COLİ ve KOLİFORM SAYIMI
100 ml örnek düzenekten süzülür. Örneğin süzüldüğü filtre kağıdı Kromojenik ECC Agar’a konur. 35-37ºC’de 18-24 saatlik inkübasyonun ardından oluşan mavi renkteki koloniler E. Coli, pembe renkteki koloniler de diğer coliform grubu bakteriler olarak değerlendirilebilir. Toplam coliform sayısı, mavi ve pembe kolonilerin toplamıdır.
STAPHYLOCOCCUS AUREUS SAYIMI
100 ml örnek düzenekten süzülür. Örneğin süzüldüğü filtre kağıdı BPA (Braid Parker Agar)'a konur. 35-37ºC’de 48 saatlik inkübasyonun ardından oluşan siyah, etrafı tipik şeffaf zon ile çevrili koloniler S. aureus olarak sayılır.