Türk Gıda Kodeksi Siyah Çay Tebliği’ne göre çayın kuru maddesinde bulunan kafein miktarı (g/g, %):
Siyah çayda en az: 1,6
Süzen poşette en az: 1,6 olmalıdır.
Üretilmiş olan çayın bu kriterlere uyup uymadığının analizi HPLC metodu ile yapılır.
HPLC metodunun prensibi; Magnezyum oksitli ortamda 90°C sıcaklıktaki su ile deney numunesinden kafeinin ekstraksiyonu, süzülmesi ve bir UV dedektörün kullanıldığı HPLC tekniği ile kafeinin tayininin yapılması şeklindedir.
Malzemeler:
HPLC, UV dedektörlü
HPLC için kromotografik kolon ( C18 )
Filtreler; 0,45 μm
Su banyosu ( 90°C )
Analitik terazi ( 0,001 g hassasiyette )
Vialler
Disposable enjektör
Genel laboratuvar cihaz ve malzemeleri
Kimyasallar:
Metanol
Taşıyıcı faz ; metanol/ su karışımı ( 600 ml metanol suyla 2 L’ye tamamlanır. )
Etanol/su karışımı ¼ ( v/v )
Magnezyum oksit
Stok kafein çözeltisi; 0,500g kafein / L ( etanol / su karışımı ile hazırlanır )
Standart kafein çözeltileri;
A: 0,010g kafein / L ( stok kafein çözeltisinden 2,0 mL alınıp su ile 100 ml’ye seyreltilir. ) Kafeini alınmış mamuller için kullanılmalıdır.
B: 0,050 g kafein /L ( stok kafein çözeltisinden 10 mL alınıp su ile 100 mL’ye seyreltilir. ) Kafein içeren mamuller için kullanılmalıdır.
Uygulama:
Yeşil ve siyah çay numunesinden 1g, çözünebilir çay numunesinden 0,5 g alınır.
Çaya 4,5 g + 0,5 g magnezyum oksit ve 300 ml su ilave edilir. Kapağı kapatılır ve tartılır.
İçerik karıştırılır. Kapağı kapalı bir şekilde 90°C’deki su banyosunda 20 dk. sürekli çalkalanarak ısıtılır.
Şişe su banyosundan çıkarıldıktan sonra soğutulur, kurulanır ve tartılır. Soğutulmuş ve kurulanmış şişenin ağırlığı önceki tartıma eşit olmalıdır.
İçindekilerin dibe çökmesi için bekletilir, kapağı açılır ve içindekilerin bir kısmı 0,45 μm’lik filtreden süzülür.
Süzüntünün 1,0 ml’si 10 ml’lik ölçülü balona alınır ve çizgisine kadar su ile tamamlanır. ( Kafeini alınmış ürünler için seyreltme yapılmaz. )
Numune hazırlığından sonra HPLC cihazı ile numune çalışılır. Çıkan sonuç ile hesaplamalar yapılır.
Hesaplama:
Kafeinli çaylar için :
% Kafein içeriği ( m/m ) = Ax/ AC x cBx ( 10x300) / (1xm0x1000)x ( 100/w ) x 100
Ax = Deney çözeltisinin verdiği kafein pikinin alanı
Ac = Standart kafein çözeltisinin verdiği kafein pikinin alanı
CB = Standart kafein çözeltisi B’nin konsantrastonu g / L
M0 = Deney için kullanılan numunenin kütlesi
W = Deney numunesinin kuru madde içeriği
Kafeinsiz çaylar için :
% Kafein içeriği ( m/m ) = Ax/ AC x cAx 300 / (m0x1000)x ( 100/w ) x 100
CA = Standart kafein çözeltisi A’nın konsantrasyonu g / L
Çay üretim alanlarındaki hijyen analizlerinizi Hytech Slide ile kolaylıkla gerçekleştirebilirsiniz.