Ekipman ve malzemeler

Geniş ağızlı, 300 ml’lik erlenmeyer deney tüpü
Pamuk, nonabsorbent
Huni, kısa saplı, 90-100 mm çapında
Filtre kağıdı, 18 cm çapında, katlı
Silikon karpit kaynatma taşları
Çeker ocak 
Yüksek hızlı, patlamaya dayanıklı mikser
İnce katmanlı kromotografi veya  yüksek performanslı likit kromotografi
İnkübatör, 22-25°C

Ortam

Uzun veya kısa taneli pirinç
Aflatoksin, sterigmatoksin, okratoksin, patulin, penisilik asit, T-2 toksin, sitrinin, oxanthomegnin, luteoskyrin, zearalenone ekstraksiyonu için kloroform
Deoxynivalenol ekstraksiyonu için metanol
Uygun mikotoksin standardı
NaOCl solusyonu, 5%

Toksin Üretimi

300 ml’lik geniş ağızlı erlenmayer içerisine, 50 gr pirinç ve 50 ml distile su eklenir. Erlenmayerin ağız kısmı pamuk ile tıkanır ve 20 dakika 121 °C’de 15 psi  otoklavda bekletilir. Aseptik olarak ayrı bir soğutulmuş tüpe tek tek  isole edilmiş küfler aşılanır. 22-25°C’de (15-20 gün) tüpün tüm yüzeyinde gelişme olana ve miselyum tüpün altına nüfuz edene kadar inkübasyon devam eder. Her tüpe 150 ml kloroform (Deoxynivalenol ekstraksiyonu için 15 ml metanol kullanılır) kısa saplı huni kullanılarak pamuk tıkaç çıkarılmadan eklenir (küf sporlarının dağılmasını minumumda tutmak için). Deney tüpü içindeki solvent kaynayıncaya kadar çeker ocakta buhar banyosunda ısıtılır.

Spatula ile küflü pirinç kalıbı dağıtılır ve tüp içeriği blender içerisine aktarılır ve yüksek hızda 1 dakika karıştırılır. Blender içeriği filtre kağıdı ile süzülerek süzüntü  kısa cam huni içerisinden 300 ml’lik erlenmayer tüp içerisinde toplanır. Filtre üzerinde kalan blender içeriği tekrar blendıra konulur, 100 ml ısıtılmamış solvent eklenir ve 1 dakika yüksek hızda karıştırılır. Yukarıdaki gibi filtre edilir. Filtre edilmiş karışımı içeren tüp içerisine kaynatma taşları eklenir ve 20-25 ml olana kadar evapore edilir. Eğer analiz hemen yapılamayacaksa, kuruyuncaya kadar evaporasyon devam ettirilir ve tüp karanlık bir ortamda muhafaza edilir.

Tüm cam malzeme sabunlanmadan ve su ile temizlenmeden önce 5%’lik  NaOCL çözeltisi ile durulanır. Kalan pirinç kalıbını içeren kap 5%’lik  NaOCl çözeltisinde otoklavda sterilizasyondan önce 72 saat bekletilir.

Toxin Analizi

Mikotoksin standardının doğru uygulanması toksinin hem kalitatif hem de kantitatif analizi için gerekir. Küf kültüründen mikotoksinlerin ekstraksiyonunda  ince kromotografi yada likit kromotografi  kullanılır.