Su örneklerinin analizinde yüksek sayıda saptanan enterokoklar fekal kontaminasyon göstergesi olarak kabul edilir.
Selektif Besiyerine Ekim
Enterokokların aranmasında genellikle 100 ml su örneği, 100 ml çift kuvvetli selektif sıvı besiyeri ile karıştırılarak 36±1°C 'da 22-24 saat süre ile inkübasyona bırakılır. Bu analiz için kullanılabilecek ticari hazır besiyerleri mevcuttur. 24 saat sonunda besiyerinde bulanıklık görülüyorsa test pozitif demektir. Eğer bulanıklık yoksa, inkübasyon 24 saat daha devam ettirilir. Süre sonunda yine bulanıklık olmamışsa negatif olarak değerlendirilir.
Çift kuvvetli olarak hazırlanan bazı selektif besiyerlerinde sonuç; besiyeri su örneği ile karıştırılarak inkübasyona bırakıldıktan sonra renkte oluşan değişime göre verilir. Eğer besiyeri rengi değişmişse test pozitif, renkte bir değişme olmamışsa negatif olarak değerlendirilir. Böylece daha kısa sürede sonuç alınabilir.
Sayım, standart EMS yöntemi ile yapılabileceği gibi membran filtrasyon yöntemi de bu amaç için kullanılabilir. Membran filtrasyon yöntemi için genellikle ticari olarak satılan selektif katı besiyerleri kullanılır. Su örneği membran filtreden geçirilir. Filtre, petri kutusuna aktarıldıktan sonra besiyerinin gerektirdiği süre ve sıcaklıkta inkübe edilir. Bu analiz için ağırlıklı olarak kullanılan besiyerleri sodyum azid içerirler. Besiyeri bileşimindeki sodyum azid refakatçi Gram negatif florayı inhibe eder. Enterokoklar TTC 'yi indirgeyerek kırmızı renkli formazon 'a dönüştürürler. Dolayısıyla koloniler kırmızı renkleri ile tanımlanır. Alternatif besiyerleri de bulunmaktadır.
Biyokimyasal İdentifikasyon
Bu amaçla, izole edilen tipik koloniler uygun bir sıvı besiyerinde geliştirilerek öncelikle Gram reaksiyonları incelenir. Mikroskobik inceleme sonucunda enterokoklar, gram pozitif olduklarından mavi mor renkte 0,6-2,0 X 0,6-2,5 μm, oval, çiftler veya kısa zincirler halinde görülürler.
Enterokokları, kendileri gibi Gram pozitif, fakültatif anaerobik olan Aerococcus, Gemella, Lactococcus, Leuconostoc, Melissococcus, Pediococcus, Saccharococcus, Staphylococcus, Stomatococcus, Streptococcus, Trichococcus ve Vagococcus 'lardan ayırabilmek amacı ile
Hareket, 10°C 'de gelişme, 45°C 'de gelişme, pH 9,6'de gelişme, %6,5NaCl 'de gelişme,
%40 safra tuzunda gelişme, Katalaz reaksiyonu gibi özelliklere bakılarak karşılaştırma yapılır.
Enterokoklar, genellikle hareketli, 10°C 'de gelişme pozitif, 45°C 'de gelişme pozitif, pH 9,6'de gelişme pozitif, %40 safra tuzunda gelişme pozitif, Katalaz reaksiyonu negatif özellikler gösterirler.
Aerokoklar bazen zayıf katalaz veya pseudokatalaz reaksiyonu gösterirken enterokoklar da pseudokatalaz üretebilirler.
Bilindiği gibi, streptokokların serolojik D grubu içinde yer alan enterokoklardan E. faecalis ve E. faecium gıda organizmaları olarak önem taşıyan iki türdür. Bu iki tür için önemli olan bazı biyokimyasal testler mevcuttur. Özellikle şeker testleri, bu iki türü birbirinden ayırmada anahtar niteliğindedir. Bu temel testlerin yanı sıra 16 türü birbirinden ayırabilmek amacı ile; hareketlilik, 45 ve 50 oC 'de gelişme ile %6,5 NaCl, %0,04 tellurit, %0,01 tetrazolyum, %0,1 metilen mavisi içeren sütte gelişme, sarı pigment oluşumu, hemoliz reaksiyonu, arjinin ve hipurat hidrolizi, Voges-Proskauer reaksiyonu ile α-sikloz, L-raminoz, sakkaroz, laktoz, rafinoz, melezitoz, gliserol, adonitol, sorbitol ve mannitol 'den asit oluşum reaksiyonları incelenebilir.
Özellikler
E. faecalis E. faecium
Potasyum telluritin redüksiyonu + v
Tetrasolyumkloritin redüksiyonu + v
Arjininden amonyak oluşumu + +
Melibiozdan asit oluşumu - +
Sorbozdan asit oluşumu - +
v = değişken
Hızlı Analiz Yöntemi
Suda enterokok aranmasında hızlı bir yöntem olarak ticari olarak hazırlanmış, enterokokları diğer bakterilerden ayırmak amacıyla, besiyerine kromojenik substratlar ekleyerek, enterokoklara özgü bazı enzimlerin bu substratı parçalaması ve renk değişimi gözlenmesi amaçlanmış besiyerleri mevcuttur.
Mikrobiyolohik analizlerinizde Diatek tarafından satın alabileceğiniz hazır besiyerlerini güvenle kullanabilirsiniz.